《刺客信条2》的背景设定在1486年的意大利文艺复兴时代，地点在威尼斯、佛罗伦萨以及托斯卡纳。

玩家依旧是操作戴西蒙德的祖先，本次的祖先名叫艾吉奥。

艾吉奥出身贵族，但是没多久他就被卷入了他人对他家族的阴谋中，于是他决定找阴谋策划者复仇。在艾吉奥的任务中，他将要面对强大的Grimaldi家族，这个家族也就相当于今天黑手党的前身。除了要对抗Grimaldi家族的成员，我们知道圣殿骑士团也会回来。

作为敌方重要角色的Carno Grimaldi，在威尼斯当地可谓有权有势。很显然，这个家伙身边保护重重，而他对自己过于自信也是他失败的原因 。